簡要描述：蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是一種全面分析樣品中蛋白質(zhì)的方法。它的過程包括從樣品中提取蛋白質(zhì)、使用消化酶切割蛋白質(zhì)，再通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）分析肽段的結(jié)構(gòu)信息。近數(shù)十年，大量的改進(jìn)方法應(yīng)用于LC-MS/MS，例如色譜柱和色譜填料的改進(jìn)，以及質(zhì)譜的靈敏度和掃描速度的提升，使得同時對多個樣本進(jìn)行分析得以實現(xiàn)，與此同時，對于低豐度蛋白的定性以及定量評價也得以實現(xiàn)。
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蛋白質(zhì)組學(xué)用蛋白質(zhì)增溶劑
LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution
◆蛋白質(zhì)組學(xué)中的蛋白提取挑戰(zhàn)
蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是一種全面分析樣品中蛋白質(zhì)的方法。它的過程包括從樣品中提取蛋白質(zhì)、使用消化酶切割蛋白質(zhì)，再通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）分析肽段的結(jié)構(gòu)信息。近數(shù)十年，大量的改進(jìn)方法應(yīng)用于LC-MS/MS，例如色譜柱和色譜填料的改進(jìn)，以及質(zhì)譜的靈敏度和掃描速度的提升，使得同時對多個樣本進(jìn)行分析得以實現(xiàn)，與此同時，對于低豐度蛋白的定性以及定量評價也得以實現(xiàn)。
LC-MS/MS的前處理步驟——蛋白質(zhì)提取和酶切對蛋白質(zhì)組學(xué)實驗結(jié)果起到至關(guān)重要的作用。其中最大的挑戰(zhàn)是提高蛋白質(zhì)的回收率同時還需要在低漏切的情況下保證酶解效率。尤其是膜蛋白這類疏水性高難以提取的一類蛋白質(zhì)。在蛋白質(zhì)組學(xué)中膜蛋白的提取常需要使用強力的增溶劑。然而，強力的增溶劑會抑制后續(xù)步驟使用的消化酶的活性，影響肽段分離和LC-MS/MS中的離子的檢測。
因此，F(xiàn)UFJIFILM Wako開發(fā)了以脫氧膽酸鈉為主要成分的相轉(zhuǎn)移溶劑（Phase Transfer Surfactant），這是一款可溶解難溶蛋白，不抑制消化酶的活性且容易去除的理想增溶劑1）。使用了它的前處理法命名為PTS法，該方法已被廣泛報道為一種用于蛋白組學(xué)分析制備疏水蛋白（包括膜蛋白）的有效方法。
圖1. 使用PTS法提取蛋白
基于文獻(xiàn)1）制備
◆LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution
LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution是在蛋白質(zhì)組學(xué)前處理步驟的蛋白提取中使用的增溶劑。該產(chǎn)品基于PTS方法開發(fā)，可有效溶解難溶性蛋白，同時不抑制消化酶的活性，并可通過液-液分配方式輕松去除試劑。本產(chǎn)品是根據(jù)之前的報道PTS溶液1-2）改良的，相比以前的PTS溶液，它的蛋白增溶性和蛋白消化酶活性更高，而且因消化酶導(dǎo)致的漏切也更低。也可用于外泌體等細(xì)胞外囊泡的蛋白質(zhì)組學(xué)。
◆特點
● 可提取疏水性高的蛋白質(zhì)，包括膜蛋白
● 不抑制消化酶活性
● 通過液液分配方式可輕易去除
◆Protocol
從細(xì)胞中提取蛋白
從細(xì)胞外囊泡（EV）中提取蛋白（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）
詳細(xì)的Protocol請參考產(chǎn)品的使用說明書。
◆數(shù)據(jù)
蛋白的可溶性
| 使用不同的表面活性劑混合組成的各種PTS溶液，從人肝微粒體組分中提取蛋白，比較各實驗組的蛋白濃度。 【結(jié)果】 與其他表面活性劑成分的傳統(tǒng)PTS溶液相比，本產(chǎn)品顯示高可溶性 |
蛋白消化酶的活性和漏切的發(fā)生率
蛋白消化酶的活性
PTS溶液 | yi蛋白酶 | 賴氨酰內(nèi)肽酶（Lys-C） | ||||
PTS溶液的濃度 | 活性 | 初速度 | PTS溶液的濃度 | 活性 | 初速度 | |
SDC+SLS | 4 mM | 12.6 | 4.4 | 4 mM | 2.5 | 1.9 |
SDC+SC | 8 mM | 5.7 | 2.3 | 8 mM | 2.6 | 2.4 |
SDC+CDC | 8 mM | 7.5 | 4.4 | 8 mM | 2.4 | 1.8 |
本產(chǎn)品 | 8 mM | 10.3 | 4.6 | 8 mM | 2.6 | 1.8 |
漏切的發(fā)生數(shù)
PTS溶液 | 漏切發(fā)生數(shù) |
UDC | 586 |
SDC+SLS | 723 |
SLS+SC | 273 |
本產(chǎn)品 | 291 |
CDC：e去氧膽酸；SC：膽酸鈉；SDC：脫氧膽酸鈉；SLS：月桂酰肌氨酸鈉；UDC：xiong去氧膽酸
【結(jié)果】
盡管SDS+SLS的yi蛋白酶活性最高，但漏切的數(shù)量最多。相比之下，盡管本產(chǎn)品在yi蛋白酶中的酶活性低于SDC+SLS，但賴胺酰內(nèi)肽酶的裂解活性最高，漏切數(shù)較低。因此，本產(chǎn)品是一款酶活性高，漏切數(shù)少，性能平均的PTS溶液。
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 127-07101 | LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution LysoPure™ 蛋白提取PTS溶液 | 5 mL | 基因研究用 | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 038-21141 | Cell Lysis Buffer M 細(xì)胞溶解緩沖液M | 100 mL | 基因研究用 | - |
| 034-21143 | Cell Lysis Buffer M 細(xì)胞溶解緩沖液M | 250 mL | 基因研究用 | - |
| 182-02451 | RIPA Buffer | 100 mL | 基因研究用 | - |
| 188-02453 | RIPA緩沖液 | 250 mL | 基因研究用 | - |
| 295-73901 | LysoPure™ Nuclear and Cytoplasmic Extractor Kit 核和細(xì)胞蛋白提取試劑盒 | 100次用 | 蛋白質(zhì)組學(xué)研究用 | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 125-05061 | Lysyl EndopeptidaseR, Mass Spectrometry Grade (Lys-C) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級 | 20 μg×5 | 蛋白質(zhì)組學(xué)研究用 | - |
| 121-05063 | Lysyl EndopeptidaseR, Mass Spectrometry Grade (Lys-C) 賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，MS級 | 20 μg | 蛋白質(zhì)組學(xué)研究用 | - |
| 202-15951 | Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry Grade 質(zhì)譜級豬胰腺來源yi蛋白酶 | 20 μg×5 | 蛋白質(zhì)組學(xué)研究用 | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 2次用 | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 10次用 | 基因研究用 | - |
| 293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS | 96次用 | 蛋白質(zhì)組學(xué)研究用 | - |
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