間充質干細胞專用外泌體生產用培養基

EV-Up™ 間充質干細胞專用外泌體生產用培養基是一種間充質干細胞（MSC）專用的外泌體（EVs）生產培養基。只要將EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用添加劑，無動物源成分添加至EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用基礎培養基，無動物源成分中配成培養基即可使用。本品不含血清及動物源成分， 適用于多種組織來源的MSCs的培養。

◆特點

●　比血清培養基的外泌體分泌量高

●　培養的外泌體活性高

●　維持MSC的高存活率

◆適用細胞

適用于多種組織來源的MSC

細胞種類

骨髓來源的MSC，脂肪來源的MSC，臍帶基質來源的MSC等

◆使用方法

*1：往EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用基礎培養基，無動物源成分（產品編號：053-09451）中添加了EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用添

*1：加劑，無動物源成分（產品編號：298-84001）即為EV-Up™ 培養基

6孔板培養

1. 將各種間充質干細胞以5×10³的密度來鋪板，然后用增殖培養基（血清培養基或無血清培養基）培養至80-90%匯合。

2. 去除增殖培養基后加入4 mL EV-UP™培養基。培養3-5日。

3. 回收培養上清，2,000×g離心20分鐘，用干凈試管收集離心后的上清液，避免吸入沉淀。

※　可在培養上清中添加1/100的EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑來抑制試管或吸頭等對EV的吸附。

4. 用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS提取培養上清中的外泌體。

◆應用數據

外泌體粒子數

利用PS親和法^*1從各種培養基的培養上清液中提取外泌體，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技術對外泌體的粒子數進行分析。

*1：在金屬離子的存在下，結合分子通過磷脂酰si氨酸（PS）捕獲細胞外囊泡后，再使用螯合劑洗脫的方法。

*1：使用MagCapture™外泌體提取試劑盒PS時，可以通過本方法進行外泌體提取。

*2：Exosome-Depleted FBS

FUJIFILM Wako研發的EV-Up™ 培養基，在培養MSC時，釋放的外泌體粒子數是D-MEM+10% EV depleted FBS培養的2.6倍左右。另外，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培養基與血清培養基相比，可以分泌更多的EV。

抗纖維化活性

用TGFβ刺激培養人胎肺成纖維細胞（TIG3細胞），用PS親和法從不同培養基的培養上清中提取EV，取5×10⁷ particles/mL提取出的EV，用RT-PCR對纖維化標記物（Collagen III，αSMA）的基因表達水平進行定量，以比較抗纖維化活性。

使用FUJIFILM Wako研發的EV-Up™ 培養基的EV，強力抑制了由TGFβ引起的纖維化相關基因的表達。由此可見，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培養基能培養出的外泌體活性更高。

細胞存活率

將在血清培養基中擴增培養的人骨髓來源的MSC用不同培養基培養5天，然后檢測產生外泌體后的細胞存活率。

FUJIFILM Wako 的EV-Up™ 培養基培養的MSC與D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同樣高的細胞存活率。

外泌體標志物蛋白表達

用PS親和法從培養上清液中提取外泌體，并通過ELISA檢測標記蛋白CD9、CD63和CD81的表達。

FUJIFILM Wako的EV-Up™ 培養基與其他血清培養基相比，不同外泌體標記分子的表達更好。

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